分子生物学中的蛋白质学 抗体 抗原 一抗 二抗

2022-05-26

抗原是指所有能诱导机体发生免疫应答的物质,也就是能被T淋巴细胞或B淋巴细胞表面的抗原受体特异性识别与结合,活化这两种细胞使之增殖分化,产生免疫应答产物,并能与相应产物在体内外发生特异性结合的物质。因此抗原物质具备两个重要特性,免疫原性和免疫反应性。免疫原性即指抗原诱导机体发生特异性免疫应答,产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。免疫反应性是指与相应的免疫效应物质在体内外发生的特异性结合的反应能力。根据抗原的来源,可将抗原分为以下几种:

一、异种抗原,指病原微生物、类毒类等不同种族之间的抗原。

二、同种异性抗原,存在于同一种族不同个体之间的抗原,如ABO血型抗原、Rh抗原等。

三、自身抗原,自身成分分为隐蔽的自身抗原、改变的自身抗原等,如眼晶状体蛋白等。

四、异嗜性抗原,存在于不同物种间,表面无种属特异性的共同抗原,可存在于动物、植物、微生物及人类中,如溶血性链球菌与人心内膜、肾小球基底膜所具有的共同抗原就是异嗜性抗原。


抗原是指能够刺激机体免疫系统发生免疫应答,产生抗体或者致敏淋巴细胞,并能够与相应抗体和致敏淋巴细胞在体内或体外特异性结合发生免疫反应的物质。


抗体是免疫球蛋白,一般是由于人体的免疫系统受到外界感染后形成的物质,能够起到保护人体的作用,一般可以分为IgM、IgG、IgD、IgA、IgE五种,由于抗体的类型不同,所以特征也会有一定的差异。


抗体是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。它(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。


一抗和二抗的区别:第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合;第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体,主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体,即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。


抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答,由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团,而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗)。一抗:可以特异结合底物,就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗:可以和一抗结合,并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团),作用是检测一抗。如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团),则不需要二抗。但这样成本很高,因为一种一抗只识别一种底物。所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记,再来检测一抗。而一抗识别底物。这样,当一抗结合到底物上,就可以通过二抗检测出来。


一抗

中文名称:【CD3】小鼠抗人CD3抗体

英文名字:Mouse Anti Human CD3


二抗

中文名称:大鼠抗小鼠IgG3二抗-AP标记

英文名字:Rat Anti-Mouse IgG3-AP

背景资料

AP(Alkaline Phosphatase,碱性磷酸酶)是一种含锌的同源二聚体糖蛋白,分子量为56KDa。它是一种能够将对应底物(核酸、蛋白、生物碱等)去磷酸化的酶,即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,属于磷酸酶的一种,在碱性环境有最大活力,在碱性环境中可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物,是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶。与辣根过氧化物酶(HRP)相比,ALP的优点是稳定性高、灵敏度高,缺点是成本高,标记困难。


应用类型

该产品适用于一般免疫学实验,详见该产品英文说明书。

免疫原:小鼠IgG3

来源宿主:大鼠

反应性:该二抗与小鼠IgG3重链有特异性反应,与其他种属免疫球蛋白有交叉反应

保存建议:该二抗为液体形式,2-8℃保存,长期保存推荐-20℃,产品有效期见包装




样本的物种

一般来说,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择比较重要,对与免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。一抗的来源主要有兔子和小鼠这两个物种,意思也就是,如果你的样本是兔子的,那就避免买兔来源的一抗;如果你的样本是小鼠的,那就避免买小鼠源的一抗。


单克隆与多克隆

由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合。同一个抗原决定簇在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。

在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高。

rat anti mouse IL-2 一抗 

rabbit anti rat-HRP


二抗的选择

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以广泛应用,如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性,因而使用特定标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。

二抗,广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求,一般来说,选择合适的二抗需要从以下几个方面考虑:

1.一抗的种属来源

根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如:一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

2.一抗的类别亚型

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。单克隆抗体的类别及亚型通常会在产品说明书中有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗。此种抗体在双标记实验中尤其合适。

3.二抗的藕联标记

一般来讲,藕联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP)、荧光基团、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。WB和ELISA常用的二抗是酶标二抗,而免疫荧光实验中通常使用荧光基团标记的二抗,而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。

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