如图所示，化合物的性质、固定相（色谱柱/填料）与流动相是左右方法开发的关键因素。通常状况分离物是不可以变更的，因此主要通过调整固定相与流动相进行方法开发。

进行分析方法开发前，先进行化合物、分析条件等的信息收集。如果有分析案例的话，可参考对应案例进行方法优化。如果没有案例可参考时，进行方法筛选会是一个不错的手段。方法筛选是通过流动相与色谱柱等进行交叉组合筛选实现。进行方法筛选时，通过基本条件的设定，可以快速找到适合的流动相条件与色谱柱规格，从而实现快速的方法开发。

反相HPLC方法筛选中，除流动相中的有机溶剂外缓冲溶剂（水溶液）的pH也对分离有明显影响，因此应筛选的项目较多。鉴于需要探讨的项目偏多，为了缩短分析时间选用50mm的短柱进行方法开发会更为高效。具有良好峰形与卓越耐久性的Triart系列产品因备有丰富的尺寸型号供选择，因此非常适用于进行方法筛选。通过将Triart色谱柱、有机溶剂、流动相pH进行组合，可快速实现方法初探。

色谱柱与流动相基本条件的选择

分离方法最佳化（最终方法的设定）