使用反相色谱柱分离多肽和蛋白质的要点-YMC代理

2025-09-29

逆相カラムでペプチド・タンパク質の分離をする際は、カラムの選択がポイントとなります。分離対象物質の分子量に合わせて適切なカラムを選択し、グラジエント勾配や移動相溶媒、カラム温度など分離条件の最適化を行います。

ペプチド・タンパク質分離に影響するファクター
カラム

ターゲットのペプチド・タンパク質の分子量や疎水性に合わせてカラムを選択 一般的に分子量が大きいほど、細孔径が大きく疎水性が低いカラムが適する

移動相

0.1% TFA/acetonitrileのグラジエント溶出がファーストチョイス  イオン性に差がある混合物の場合、TFAの濃度や酸の種類、pH値の変更も有効 LC/MSではギ酸を含む移動相を多用 分子量の大きいタンパク質では溶出力の高い2-propanolの添加も効果的

温度

分子量が1万以上のタンパク質において、高温分析が非常に効果的 高温条件を使用することで、抗体など15万程度までのタンパク質の分離が可能  高温条件でも耐久性のあるカラムを選択

ペプチド・タンパク質分離におけるカラム選択ガイド

タンパク質およびペプチドを分離する際、分離対象化合物の分子量を目安にカラムの選定を行います。Triart C18/C8は、高温条件での使用により分子量3万程度までのペプチド・タンパク質の分離が可能です。より大きい分子量のタンパク質では、分子が十分に拡散できるワイドポアのカラムが有効です。細孔径が30 nmのTriart Bio C4は、高温条件との組み合わせでおよそ15万程度まで分析可能です。 高温条件では、移動相の粘度の低下と物質移動速度の改善によりピーク形状が改善されます。高温条件でも耐久性の高いTriartシリーズはペプチド・タンパク質の分析に有効です。Triart以外にもシリカゲル基材やコアシェル基材の製品もラインナップしているため、化合物や分離条件に合わせて選択できます。

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